來(lái)源:蘇州邁萊柏系統工程有限公司發(fā)布時(shí)間2021.09.16
無(wú)菌操作區
無(wú)菌操作區是只限于細胞培養及其他無(wú)菌操作的區域,最好能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。在一般環(huán)境的空氣中,由于存在許多塵埃和雜菌,較易造成污染。
因此,接種工作要在空氣經(jīng)過(guò)滅菌的環(huán)境里進(jìn)行,小規模的無(wú)菌環(huán)境可利用超凈工作臺創(chuàng )造,大規模的需建無(wú)菌室。
理想的無(wú)菌操作室應劃為三部分∶
1、更衣室:供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
2、緩沖間:位于更衣間與操作間之間,用于準備工作,還有防止污染的作用,以保證操作間的無(wú)菌環(huán)境,同時(shí)可放置恒溫培養箱以及必需的小型儀器。
3、無(wú)菌操作間:無(wú)菌操作間則專(zhuān)用于無(wú)菌操作、細胞培養,其大小要適當,且其頂部不宜過(guò)高以保證紫外線(xiàn)的滅菌效果﹔墻壁光滑無(wú)死角以便清洗和消毒,無(wú)菌操作間容積小且為密閉式,一般無(wú)菌操作間的空氣消毒用紫外線(xiàn)燈,有的實(shí)驗室使用無(wú)臭氧紫外線(xiàn)消毒器或電子消毒滅菌器。
凈化工作臺∶操作簡(jiǎn)單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細菌培養室使用的凈化工作臺主要有兩種:(a)側流式或稱(chēng)垂直式(b)外流式或稱(chēng)水平層流式。
孵育區
孵育區也稱(chēng)培養區,本區對無(wú)菌的要求雖不比無(wú)菌區嚴格,但仍需清潔無(wú)塵,因此也應設置在干擾少而非來(lái)往穿行的區域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行,后者費用高,一般實(shí)驗室多采用孵箱進(jìn)行工作。
制備區
制備區主要進(jìn)行培養液及有關(guān)培養用的液體等的制備。應設有試劑柜、器械柜、實(shí)驗臺和上水道、電源等,配備的主要儀器設備有水純化裝置、天平、微波爐、pH計、抽氣泵、電爐、培養分裝器、各種規格的培養瓶、培養皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶等。
在有天平、pH計、磁力拌器等設備下完成制備以后,應在無(wú)菌操作臺進(jìn)行過(guò)濾除菌。液體制備直接關(guān)系組織細胞養的成敗,因此必須嚴格無(wú)菌操作。
儲藏區主要存放各類(lèi)冰箱、干燥箱、液氫罐、無(wú)菌培養液、培養瓶等,此環(huán)境也需要清潔無(wú)塵。為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般為液氫溫度-196℃。
細胞的凍存過(guò)程需要一系列程序降溫,一般為4℃下存放30min。轉放-20 ℃ 1 h,再轉入-80~-70℃過(guò)夜,之后才可以轉移到液氫內(-196℃)。因此儲存區必須配備冰箱、低溫冰箱、超低溫冰箱和液氫罐等設備。
清潔和消毒滅菌區
清潔和消毒滅菌區應與其他區域分開(kāi),主要進(jìn)行所有細胞培養器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作,應備有高壓蒸汽滅菌鍋、細菌過(guò)濾設備、電熱干燥箱、消毒柜、排風(fēng)設備等。
細胞實(shí)驗室的建設要求
環(huán)境要求
溫度:儀器還是操作對溫度沒(méi)有特殊要求,維持舒適的溫度即可,比如18~26度。
濕度:過(guò)高的濕度會(huì )導致微生物的滋生,所以建議正常維持濕度在70%以下。
潔凈度:細胞實(shí)驗對潔凈區并沒(méi)有要求,細胞實(shí)驗里面只有細胞操作的時(shí)候要求無(wú)菌的環(huán)境,這時(shí)要求有局部的百級,通??梢岳贸瑑襞_或者生物安全柜來(lái)實(shí)現,不過(guò)有時(shí)候為了有個(gè)更好一點(diǎn)的環(huán)境,減小超凈臺過(guò)濾器更換的時(shí)間,會(huì )維持室內的潔凈度,比如萬(wàn)級的潔凈度。
無(wú)菌無(wú)毒的操作環(huán)境和培養環(huán)境是保證細胞在體外培養成功的首要條件。細胞培養對無(wú)菌環(huán)境要求很高,在細胞操作時(shí),一般需要在100級空氣質(zhì)量條件下進(jìn)行。
在體外培養的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染,或者自身代謝物質(zhì)積累,可導致細胞中毒死亡。
照明︰滿(mǎn)足實(shí)驗用的操作照度,通常在300LUX。
維護結構要求
雖然實(shí)驗的操作對大環(huán)境沒(méi)有特殊要求,不過(guò)最好能有不產(chǎn)塵、不積塵的環(huán)境,能保證室內的清潔,并且易于清洗、不容易滋生微生物,所以在選擇維護結構時(shí),選用彩鋼板、醫療板等潔凈板材是比較好的選擇,為了保證室內的通透性,可以布置密閉窗。
消毒
通常做完實(shí)驗后,都需要做終末消毒,室內需要安裝紫外燈,利用紫外燈對空氣和表面消毒。
細胞實(shí)驗室建設的注意事項
1、放置細胞培養的實(shí)驗室,空調需要能保證在冬季能制冷,特別是在密閉的環(huán)境里,培養箱等設備的散熱量會(huì )比較大,導致室內溫度過(guò)高。
2、如果設計成凈化實(shí)驗室,就需要按凈化實(shí)驗室的要求去做,如果做的細胞涉及到生物安全,則必須按照生物安全實(shí)驗室去設計,具體根據所做實(shí)驗的種類(lèi),來(lái)確定實(shí)驗室的設計要求以及選擇的設備,是選擇超凈工作臺還是生物安全柜。
3、從事臨床細胞治療的,需要按照具體的規范要求建設。
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