一、PCR實(shí)驗室布局

PCR實(shí)驗室原則上為試劑準備區、樣品制備區、擴增區和擴增產(chǎn)物分析區四個(gè)單獨的工作區域并設有專(zhuān)用走廊，各工作區域應設緩沖間，工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區應是分隔獨立的，各工作區有明顯的標志，不能直通，如果緊密相連，需安裝物品傳遞窗。前兩區為擴增前區，后兩區為擴增后區，擴增前區與擴增后區應嚴格分開(kāi)。實(shí)驗材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等，只能從擴增前區流向擴增后區，即從試劑準備區→樣品制備區→擴增區→擴增產(chǎn)物分析區，不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區，不得逆向流動(dòng)。各工作區頂部應安裝紫外燈，紫外燈的波長(cháng)為254nm，每20㎡一支40W的紫外燈。

實(shí)驗室各區功能及主要設備

1、試劑準備區：主要進(jìn)行試劑的制備、分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區，不得經(jīng)過(guò)其它區域。試劑原材料必須貯存在本區內，并在本區內制備成所需的試劑。本區主要設備有天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。

對于氣流壓力的控制，本區并沒(méi)有嚴格的要求。

2、樣品制備區：主要進(jìn)行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。

本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進(jìn)入本區的氣溶膠污染。

3、擴增區：主要進(jìn)行DNA擴增。此外，已制備的DNA模板 (來(lái)自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來(lái)自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進(jìn)行。本區主要設備有：擴增儀、冰箱、離心機、加樣器等。

本區的壓力梯度要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免氣溶膠從本區漏出。

4、擴增產(chǎn)物分析區：擴增產(chǎn)物的測定。本區主要設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等。

本區的壓力梯度的要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區擴散至其它區域。

三、PCR實(shí)驗室通風(fēng)系統及壓力控制

各區域之間應具備單向的實(shí)驗工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護屏障，避免實(shí)驗之間的相互干擾，防止氣溶膠擴散對實(shí)驗過(guò)程造成污染。

PCR實(shí)驗室并沒(méi)有嚴格的凈化要求，但是為避免各個(gè)實(shí)驗區域交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式，嚴格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗區的壓力要求。

四、PCR實(shí)驗室裝飾

實(shí)驗室圍護結構應牢固、氣密性好；所有陰陽(yáng)角宜采用圓弧過(guò)渡；墻體內壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹(shù)脂自流坪，材料應滿(mǎn)足無(wú)縫隙、無(wú)滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

五、PCR實(shí)驗室注意事項

1、幾個(gè)區域的大小設置情況，試劑準備區、擴增區、擴增產(chǎn)物分析區，空間可以相對小一些，樣品制備區要放置生物安全柜和低溫冰箱，空間應大一些。

2、試劑準備區、樣品制備區設緊急洗眼器，以保證操作人員的安全。